中药毒性的研究方法解析

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□ 赵国平  钱三旗  暨南大学医学院　   何清湖  湖南中医药大学

　　中药毒性的内涵应包括单味药毒性和配伍后的毒性两个方面。在本草文献中，毒有四个意义：一指药物的总称，如《景岳全书》云“凡可辟邪安正者，皆可称为毒药”；二指药物的偏性，如《类经》：“药以治病，因毒为能，所谓毒药，以气味之有偏也”；三指药物作用的强弱不同，《素问·五常政大论》根据药物偏性的大小和作用的强弱，提出了“大毒治病，十去其六，常毒治病，十去其七，小毒治病，十去其八，无毒治病，十去其九”；四指药物的毒副作用。我们所说的中药毒性是指药物对机体的损害性，包括急性、亚急性、慢性和特殊毒性（致癌、突变、致畸胎等）；同时还包括了中药的副作用即在常用剂量时药物出现与治疗需要无关的不适反应。传统的中药文献对中药毒性的分级有三级和四级之分，三级分类的如新世纪《中药学》教材、《中国药典》2005版、《中药大辞典》第一、二版，将中药毒性分为大毒、有毒、小毒；而《有毒中药大辞典》则分为剧毒、大毒、有毒、小毒四类。中药毒性研究一般有以下方法。
　　有毒成分及毒理研究方法  这是中药毒性研究最常用的方法。主要是在中药成分中提取、分离毒性成分，进行相关毒性实验，如在含生物碱的中药中已知的有毒成分有：川乌、草乌、附子、天雄、雪上一枝蒿等品种中的乌头碱；雷公藤和昆明山海棠中的雷公藤碱；马钱子中的番木鳖碱；曼陀罗、洋金花的莨菪碱；苦楝子中的苦楝碱；麻黄中的麻黄碱；光慈菇、山慈菇中的秋水仙碱等。其毒理作用主要是损害神经系统。外周迷走神经和感觉神经中毒，常先呈异常兴奋后抑制，能直接影响心脏功能，并发其他脏器的变性坏死；中枢神经中毒，可引起视丘、中脑、延脑、脊髓的病理改变；呼吸中枢中毒可引起呼吸麻痹窒息。再如在含有苷类的中药中，已知的毒性成分有：洋地黄、万年青、八角枫、蟾酥、夹竹桃等品种中的强心苷，可直接作用于心脏，引起心肌收缩的增强，心率减慢；木通、黄药子、商陆等皂苷成分，对局部有刺激作用，并能抑制呼吸，损害心脏、肾脏，尚有溶血作用；白果中的银杏酸和银杏酚，苦杏仁、桃仁、郁李仁、木薯、瓜蒂等品种中的苦杏仁甙，水解后可析出氢氰酸，能迅速与细胞线粒体中氧化型细胞色素酶的三价铁结合，阻止细胞的氧化反应；芫花、广豆根等品种中的黄酮苷，可刺激胃肠道和对肝脏的损害，引起恶心呕吐、黄疸等症状。
　　中药毒代动力学研究方法　毒代动力学是运用药代动力学的原理和方法，定量地研究毒性剂量下药物在动物体内的吸收、分布、代谢、排泄过程和特点，进而探讨药物毒性发生和发展的规律性的一门科学。其主要目的是：揭示在毒性试验条件下药物所达到的全身暴露与毒性发生的内在联系；比较动物与人的全身暴露来解释毒理试验数据的价值；为临床前毒性研究的实验设计（如动物种属、试验剂量和用药方案的设计）提供依据。
　　细胞毒性试验MTT法  这是借助于细胞生物学技术直接观察中药在细胞学水平上的毒性反应。包括对细胞、细胞器形态结构的影响和对细胞整体活动的影响等。而MTT法可以快速高效地检测药物对细胞增殖的影响及毒性反应。从微观角度反映中药毒理作用的生物学基础。
　　中药血清药理学方法  目前该方法应用于中药毒性研究的尚较少，但直接用实验动物的含药血清培养细胞观察中药的毒性效应，可从微观角度阐明毒理。为从细胞分子水平阐明中药毒性机理开辟道路，值得借鉴。
　　分子生物学技术  将分子生物学方法应用于中药毒理学研究，如对中毒脏器中核酸含量测定，对药物性损伤的肝细胞中药物代谢酶和抗氧化物酶活性的测定、毒理基因组学和蛋白组学的探讨等，均将有助于从基因分子水平探讨中药毒性产生的机理与本质。
　　中药毒性研究必须注意的几个问题
　　1.中药毒性的相对性  中药是借助于药物的偏性纠正疾病的偏性，辨证准确，效如桴鼓相应。如果辨证不确，就会产生毒副作用。如日本报道的应用小柴胡汤引起间质性肺炎的案例，就是一个很好的说明。而某些药物如三氧化二砷对正常人使用反映为毒性，而用于急性粒细胞白血病却发挥了很好的治疗作用，并未发生毒副反映。
　　2.中药毒性研究的复杂性  其复杂性在于中药多使用制剂粗、用量大、毒性小、起效慢、疗程长、靶点多、给药途径以口服为主等，给中药毒理学的研究带来了困难。制剂较粗，与对照组在颜色、气味、用药量、给药途径等方面存在很大的差异，影响了各实验组间的齐同性；药量较大，超过实验动物的胃容量；毒性较低，甚至检测不出半数致死量等数据；用药疗程长，短期内可能无毒性反应，有毒性蓄积的倾向；中药从原药材到制剂的质量标准均不够严格和科学，使实验重复性受到很大的影响；中药保存条件与保存期与化学药品不同；中药尤其是复方成分复杂且难以确定，其毒代动力学研究具有许多困难与特殊性。
　　3.辨证看待古代文献毒性的记载  如七情和合中相反的涵义为配伍后能增加毒性，但并不意味着绝对不能配伍。汉末张仲景《金匮要略》中的“甘遂半夏汤”以甘遂与甘草同用；《千金翼方》肾沥散中乌头、白蔹同用；《儒门事亲》中通气丸海藻、甘草同用等，经过长期临床使用并未见有毒性反应的报道。高晓山等对病理生理条件下中药十八反进行了系统研究，认为十八反是古人在临床用药中发现的问题，病人处于病理生理状态，因此十八反应限定于专属的病理生理条件下，广泛地增加毒性，未必是十八反的普遍规律。病理生理条件下某些十八反组可显示毒性增强，死亡率升高或某些不利于治疗的情况。川乌与半夏2∶1配伍，8g生药/kg剂量对于饲喂甲状腺粉所致阳盛实验动物耐高温能力有明显的抑制作用，显示较明显毒性增强，而对正常健康动物来说，同样的高温下生存时间则较病理模型下长。提出只有在特定的病理生理条件下显示毒性增强的特点，可能为十八反的主流。
　　在GLP规范下开展中药毒理学研究。1978年美国FDA颁布了世界上第一部药品安全性评价的研究法规—《药品非临床安全研究工作质量管理规范》（Good Lab?鄄oratory Practice ，GLP），随后，GLP管理规范逐渐成为世界药品安全性评价的通行标准，已有约70个国家和地区制定了本国的GLP。且随着GLP规范的广泛采用，它所包括的范围已扩大到整个药学、药效学研究，可以说所有的非临床实验研究（质量控制、化学检测、分离提取、药理实验等）都要遵循其管理原则。所制定的SOP（Standard Operation Procedure）也正逐步向GLP规范靠扰。
　　GLP建设不仅是中药国际化、产业化的重要前提与依托，而且是对整个中医药研究工作的管理与方法学示范。以其软件建设SOP文件制作为例，包含了以下13个方面。(1)供试品和对照品的接受、贴标签、储存、处理、配制方法以及取样等；(2)动物房准备和动物的饲养管理；(3)设施和设备的维护、修理；(4)动物的转移、饲养、安置、标记、编号等；(5)动物的一般状况观察；(6)各种检查、测试等操作；(7)濒死或者已死动物的检查处理；(8)动物的尸检以及组织病理学检查；(9)实验标本的收集和编号；(10)数据处理、储存和检索；(11)研究单位、安全性研究机构、质量保证部门和专题负责人的职责；(12)工作人员的健康检查制度；（13）安全性研究机构认为需要制定标准操作规程的其他工作。在GLP规范下进行中药毒理学研究，就要将硬、软件建设工作以SOP的形式体现在上述各方面。